Лабораторная диагностика
 
 
 


КОНТАКТНАЯ ИНФОРМАЦИЯ


Телефон для справок:

(383) 344-97-27

Адрес:
630049, г. Новосибирск,
Красный проспект, 218/2
E-mail: infosib@invitro.ru















5. Методы определения физиологических антикоагулянтов

5.1. Протеин С

Для определения протеина С разработано несколько методов: иммунохимический метод, метод с хромогенным субстратом и коагуляционный. Протеин С только в комплексе с протеином S инактивирует Vа и VIII, поэтому желательно параллельно исследовать и протеин С и протеин S.
Определение протеина С с использованием хромогенного субстрата. Этот метод прост, специфичен, легко автоматизируется. Так как протеин С – витамин-К-зависимый гликопротеин, то при лечении непрямыми антикоагулянтами (антагонистами витамина К) появляются формы протеина С, которые не обладают антикоагулянтной активностью, но определяются методами с хромогенными субстратами (так называемые PIVKA-формы). Поэтому у больных, принимающих непрямые антикоагулянты, могут быть завышенными результаты определения протеина С хромогенными методами.
Определение протеина С коагуляционным методом. Метод легко автоматизируется. Коагуляционный метод оценивает активность протеина С, фиксирующегося карбоксилированной частью на фосфолипидах. РIVKA -формы не функционируют в этой системе, и тест не дает ложных результатов у пациентов, принимающих непрямые антикоагулянты или имеющих дефицит витамина К.
Исказить результаты теста могут такие факторы, как наличие мутации фактора V Лейден, присутствие в плазме волчаночного антикоагулянта, терапия гепарином. Для получения достоверных результатов очень важно качество используемой протеин-С-дефицитной плазмы.
У некоторых пациентов, принимающих непрямые антикоагулянты, выявляются чрезвычайно низкие цифры содержания протеина С. Эти результаты могут быть связаны не только с истинным дефицитом протеина С, но и с развитием резистентности фактора Vа к активированному протеину С (АПС).
Определение протеина С иммунохимическим методом. Иммунохимическое определение протеина С применяется реже, чем функциональные методы. Это объясняется тем, что данный способ выявляет только классическое снижение концентрации протеина С и не определяет его функциональную неполноценность.
В некоторых случаях при лечении больных с дефицитом протеина С непрямыми антикоагулянтами у них могут возникнуть  некрозы кожи в результате рикошетных тромбозов. Если антикоагулянты назначаются в высокой дозе без поддержки гепарином, то возникает состояние, при котором протеин С  очень быстро снижается (в норме время его полужизни в системе циркуляции 4-6 ч). В то же время витамин-К-зависимые факторы свертывания, в том числе протромбин, остаются еще в пределах нормы (у них период полужизни 16-20 ч). Эта ситуация может усугубляться тем, что непрямые антикоагулянты начинают назначать в случае развития тромбозов или угрожающей ситуации  по тромбообразованию, когда система прокоагулянтов активирована. Быстрое снижение протеина С провоцирует в этом случае массивное тромбообразование, проявляющееся вплоть до некрозов кожи. Активность протеина С следует определять до начала лечения антикоагулянтами непрямого действия и контролировать во время лечения.

Референсные значения протеина С: 94-124%

ПОВЫШЕНИЕ протеина С отмечается во время беременности.

СНИЖЕНИЕ протеина С:

  • врожденный (наследственный) дефицит или аномалии протеина С;
  • геморрагическая болезнь новорожденных;
  • заболевания печени с нарушением ее функции;
  • ДВС-синдром;
  • нефротический синдром;
  • синдром острой дыхательной недостаточности;
  • менингококковый сепсис;
  • гемодиализ;
  • лечении L-аспарагиназой;
  • лечении пероральными (непрямыми) антикоагулянтами (дефицит витамина К);
  • послеродовый и послеоперационный период.

5.2. Протеин S

Протеин S – витамин-К-зависимый белок, который является кофактором активированного протеина С. Это функция положена в основу всех известных коммерческих тест-систем определения протеина S. Описаны случаи как функционального, так и количественного дефицита протеина S. При проведении тестов важно помнить, что протеин S присутствует в плазме частично в свободном состоянии, частично в комплексе с С4-связывающим протеином (С4-СП), но активна  только свободная форма протеина S.
Определение протеина S коагуляционным методом. Для определения протеина S необходимо использовать тест-систему, содержащую очищенный активный протеин С, его субстрат – фактор Vа и дефицитную по протеину S плазму. Специфичность метода относительная, так как фактор V Лейден, высокий уровень ф.VIII и волчаночный антикоагулянт могут существенно влиять на результаты теста, а именно: с этими факторами часто проводят дифференциальную диагностику, определяя протеин S. 
Так как коагуляционный метод подвержен действию многих интерферирующих факторов и не стандартизирован, то предпочитают использовать иммунохимический метод.
Определение протеина S иммунохимическим методом. Иммунохимический метод достаточно широко распространен. Наборы последних разработок позволяют определять «свободный протеин S» прямо без предварительной обработки. Недостатком иммунохимического метода является то, что он выявляет протеолитически  неактивные формы протеина S, которые иногда появляются в плазме.

Референсные значения протеина S: 81-111%

УМЕНЬШЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ (активности) протеина S:

  • врожденный (наследственный) дефицит;
  • врожденное (наследственное) уменьшение свободной фракции протеина S;
  • заболевания печени с нарушением ее функции;
  • ДВС-синдром;
  • нефротический синдром;
  • системная красная волчанка;
  • лечение L-аспарагиназой;
  • лечение пероральными (непрямыми) антикоагулянтами;
  • прием эстрогенов (пероральных контрацептивов);
  • беременность, послеродовый период;
  • наличие аутоантител к протеину S.

5.3. Антитромбин III

Для определения активности антитромбина III (АТ) чаще всего используют метод с хромогенным субстратом. Антитромбин расщепляет субстрат, в результате чего образуется окрашенный продукт, количество которого зависит от исходной активности антитромбина III.  Существуют также иммунохимические (турбидиметрия, нефелометрия) и коагуляционные методы.
Тест может применяться для мониторинга лечения гепарином. Длительная гепаринотерапия может приводить к снижению активности АТ в плазме. Лечение высокими дозами гепарина, особенно нефракционированным гепарином, приводит к транзиторному снижению АТ по механизму потребления, особенно у больных с тяжелой патологией, при критических состояниях, при ДВС-синдроме, сепсисе, злокачественных опухолях.
У новорожденных уровень АТ составляет около 50 % и достигает уровня взрослых к 6 мес. Небольшое снижение АТ наблюдается в середине менструального цикла, в пред- и послеродовом периоде, при токсикозах второй половины беременности, в послеоперационном периоде. Эти сдвиги более выражены у пациентов с группой крови А (II), а также у пожилых.

Референсные значения АТ: 86 - 116%

СНИЖЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ (активности) АТ:

  • врожденный (наследственный) дефицит или аномалии АТ (снижение активности или чувствительности к гепарину);
  • заболевания печени (опухоли, цирроз, алкогольный гепатит);
  • нефротический синдром (протеинурия свыше 5 г/л);
  • карцинома легких;
  • ДВС-синдром;
  • множественные травмы, тяжелые роды, поздние гестозы;
  • прием эстрогенов (пероральных контрацептивов), кортикостероидов;
  • лечение L-аспарагиназой.

УВЕЛИЧЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ (активности) АТ:

  • во время менструации;
  • острый вирусный гепатит, холестаз;
  • прием анаболических стероидов;
  • лечение пероральными (непрямыми) антикоагулянтами.

6.Тесты для исследования фибринолитической системы

 

Наиболее распространенные в клинической практике методы оценки состояния фибринолитической системы основаны на:
1) исследовании времени и степени лизиса (растворения) сгустков крови или эуглобулиновой фракции плазмы (общеоценочные пробы);
2) определении концентрации плазминогена, его активаторов и ингибиторов (ТАП; ПАИ-1; ?2-антиплазмин).

6.1. Время лизиса эуглобулиновых сгустков / ХIIа зависимый фибринолиз

Определение фибринолитической активности эуглобулиновой фракции плазмы крови является важнейшим базисным методом исследования системы фибринолиза, позволяющим оценить состояние внутреннего и внешнего механизмов образования плазминогена. Метод заключается в определении времени спонтанного лизиса сгустка, образующегося из эуглобулиновой фракции бестромбоцитной плазмы при добавлении к ней раствора хлорида кальция.
Существуют и другие модификации метода эуглобулинового лизиса сгустка. Например, растворение сгустка может быть значительно ускорено предварительным введением в плазму каолинамощного контактного активатора внутреннего механизма фибринолиза, связанного с активированием комплекса факторов: фактор XII-калликреин-кининоген (“ХIIа зависимый фибринолиз”).
Метод оценки эуглобулинового лизиса требует исходного содержания в плазме фибриногена, так как при снижении фибриногена время лизиса укорачивается, что трактуется ошибочно как гиперфибринолиз. При гиперфибриногенемии время лизиса удлиняется. Поэтому при отклонениях содержания фибриногена в плазме, а также неполноценной полимеризации фибрина возможно получение ошибочных результатов. В связи с ориентировочным характером и недостаточной специфичностью в последнее время вместо теста спонтанного лизиса эуглобулинового сгустка начали использовать определение отдельных факторов фибринолиза, в первую очередь плазминогена.

 

Референсные значения: XIIа зависимый фибринолиз     4–10 мин

УКОРОЧЕНИЕ ВРЕМЕНИ ЛИЗИСА (активация фибринолиза):

  • уменьшение концентрации фибриногена – гипо- и дисфибриногенемия.

УВЕЛИЧЕНИЕ ВРЕМЕНИ ЛИЗИСА (угнетение фибринолиза):

  • гиперфибриногенемия.

6.2. Плазминоген и тканевой активатор плазминогена
(ТАП)

Определение количества плазминогена основано на гидролизе хромогенного субстрата. Определение плазминогена используют для диагностики ДВС-синдрома и тромбофилий; выявления нарушений фибринолиза; контроля лечения фибринолитическими препаратами при тромбозах, тромбоэмболиях, инфарктах.
Дефицит плазминогена крайне редкое событие, чаще встречается дефицит тканевого активатора плазминогена (ТАП). Дефицит ТАП является одним из потенциальных факторов риска тромбоза, хотя клинически это подтверждается не всегда.
Тканевой активатор плазминогена (ТАП) освобождается в кровоток из эндотелиальных клеток сосудистой стенки при стрессовых воздействиях, в частности при манжеточной пробе (дозированном пережатии вен). Сначала определяют базовый уровень ТАП, потом на 10-15 минут на предплечье накладывают жгут или раздувают манжетку, вызывающую венозный стаз, затем берут вторую порцию крови, в которой повторно определяют ТАП. Сравнивают результаты обеих проб. ТАП обладает высокой амидазной активностью, позволяющей эффективно использовать для его определения метод хромогенных субстратов.
Определение ТАП проводится у больных с тромбофилией как часть панели тестов на выявление причины тромбофилии, особенно при нагрузочных манжеточных пробах. Повышение ТАП после инфаркта миокарда рассматривается как неблагоприятный фактор. Нарушение освобождения ТАП после венозного стаза описано у больных с тромбозами и патологией почек.

Референсные значения плазминогена: 71-101%

УВЕЛИЧЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ПЛАЗМИНОГЕНА И ЕГО АКТИВАТОРОВ:

  • панкреатит;
  • панкреонекроз;
  • метастазирующий рак предстательной железы, яичников;
  • метастазы меланомы;
  • операции на легких, предстательной, поджелудочной железе;
  • гиперкатехоламинемия (стресс, тиреотоксикоз, гипертонический криз, введение адреналина);
  • патология беременности;
  • терминальные и другие состояния, сопровождающиеся развитием ДВС-синдрома;
  • цирроз печени;
  • метастатическое поражение печени (снижение антиплазминовой и антиактиваторной функции).

ДЕФИЦИТ ПЛАЗМИНОГЕНА, ЧАЩЕ ДЕФИЦИТ ТКАНЕВОГО АКТИВАТОРА ПЛАЗМИНОГЕНА:

  • рецидивирующие венозные тромбозы;
  • системные васкулиты;
  • сепсис;
  • нефротический синдром.





© ООО «Лабораторная диагностика ИНВИТРО» 2004 - 2011